La microscopie à feuille de lumière permet aux biologistes d’éclairer sélectivement une fine tranche d’un échantillon. Cette méthode peut améliorer considérablement le contraste des images en réduisant la quantité de lumière de fond, tout en restant douce, en réduisant les photodommages et le photoblanchiment au sein de l’échantillon. Récemment, Anna-Karin Gustavsson, de l’Université Rice, a publié une méthode dans Nano Letters élargissant l’utilisation de la microscopie à feuille de lumière pour inclure un objectif unique dans des chambres d’échantillonnage disponibles dans le commerce.
« Avant cela, la microscopie à feuille de lumière nécessitait généralement deux objectifs ou des chambres d’échantillonnage spécialisées », a déclaré Gustavsson, auteure correspondante et professeure adjointe de chimie. « Cette nouvelle méthode nous permet d’utiliser la microscopie à feuille de lumière avec un objectif unique dans la plupart des chambres d’échantillonnage disponibles dans le commerce. »
Gustavsson a commencé par adapter la microscopie à feuille de lumière pour fonctionner dans des puces microfluidiques, qui comportent de minuscules canaux où les chercheurs peuvent étudier des cellules dans des conditions variables. Dans cette adaptation, son équipe de recherche a développé une approche à objectif unique dans laquelle la feuille de lumière était réfléchie vers l’échantillon à l’intérieur de la puce microfluidique.
« Nous nous sommes rendu compte que nous pouvions fabriquer par nano-impression 3D un insert non cytotoxique pour générer un miroir permettant de réfléchir la feuille de lumière », a déclaré Nahima Saliba, co-première auteure et diplômée de Rice. « Nous pouvions alors utiliser cette approche pour l’imagerie en feuille de lumière à objectif unique afin de réduire directement dans la puce la fluorescence de fond, le photoblanchiment et les photodommages. »
L’équipe souhaitait étendre la méthode à objectif unique au-delà des puces microfluidiques, qui peuvent être plus compliquées à manipuler et ne sont pas compatibles avec tous les échantillons. L’astuce consistait à développer un procédé de fabrication d’inserts pouvant s’insérer parfaitement dans les chambres d’échantillonnage disponibles dans le commerce.
« Grâce à notre nouvelle approche, nous pouvons désormais placer un insert combiné dans la plupart des types de chambres d’échantillonnage, ajouter les cellules et poursuivre l’essai comme d’habitude, en cultivant et en traitant les cellules pour nos expériences. Lorsque nous sommes prêts à faire l’imagerie, le miroir nous permet de créer et de manipuler la feuille de lumière à partir du même objectif que celui que nous utilisons pour détecter la lumière provenant de l’échantillon », a déclaré Siyang Cheng, co-premier auteur de l’article et étudiant au doctorat. « L’utilisation de notre feuille de lumière à objectif unique réduit la lumière de fond lors de l’imagerie, ce qui facilite l’observation des molécules individuelles qui vous intéressent. Elle réduit également les dommages causés par la lumière et le photoblanchiment. »
Comme l’insert a été fabriqué par nano-impression 3D, il est facile de concevoir et d’imprimer des inserts pour la plupart des chambres d’échantillonnage couramment disponibles. En effet, le laboratoire de Gustavsson a déjà créé et mis en libre accès des fichiers CAO contenant des conceptions pour plusieurs chambres d’échantillonnage couramment utilisées.
« Cela ouvre à tous ceux dont le système bénéficierait de ce type d’éclairage sélectif l’accès à une version plus perfectionnée de la microscopie à feuille de lumière, permettant une meilleure imagerie avec moins de dommages pour l’échantillon, sans avoir à modifier les flux de travail de préparation des échantillons », a déclaré Gustavsson.
Article : Versatile and Scalable Reflective Micromirrors for Single-Objective Light Sheet Microscopy – Journal : Nano Letters – DOI : Lien vers l’étude
Source : Rice U.
